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蛋白質含量測定是生物化學和分子生物學中的一項重要技術，以下是幾種常用的蛋白質含量測定方法： 一、凱氏定氮法- 原理：利用濃硝酸將蛋白質消化分解，使其中的氮轉變成銨鹽，再與濃NaOH作用，使氨氣放出并被吸收在酸液中，用滴定法測定多余的酸，從而可以知道蛋白質中的含氮量。由于蛋白質中氮的含量比較恒定，一般為14%～16%，因此可以通過測定樣品中的氮含量來計算蛋白質含量。
- 特點：該方法操作繁瑣，但結果較為準確，是經典的蛋白質含量測定方法之一。
二、雙縮脲法- 原理：在堿性溶液中，蛋白質與Cu2+離子形成紫藍色的絡合物，該絡合物在540nm波長處有最大光吸收。絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，因此可以比色測定蛋白質含量。
- 特點：該方法操作簡便、快速，適用于0.5~10mg/mL濃度的蛋白質溶液測定。但需要注意的是，某些物質如硫酸銨、tris緩沖液和某些氨基酸可能會干擾測定結果。
三、酚試劑法（福林-酚試劑法）- 原理：蛋白質中的酪氨酸和色氨酸殘基在堿性條件下與酚試劑反應生成深藍色產物，該產物在特定波長（如650nm或500nm）下具有最大光吸收。通過測定吸光度值可以計算蛋白質含量。
- 特點：該方法靈敏度高，但操作相對復雜，需要制作標準曲線進行比色測定。測定范圍通常為0.03~0.5mg/mL（根據波長和具體條件可能有所不同）。
四、紫外吸收法- 原理：大多數蛋白質在280nm波長處有特征的最大光吸收，這是由于蛋白質中的酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸殘基的苯環含有共軛雙鍵。在一定濃度范圍內，蛋白質溶液在280nm的光吸收值（A280nm）與其濃度成正比，因此可以作定量測定。
- 特點：該方法操作簡便、快速，適用于0.1~1.0mg/mL濃度的蛋白質溶液測定。但需要注意的是，某些物質如核酸和其他含共軛雙鍵的化合物可能會干擾測定結果。
五、考馬斯亮藍法（Bradford法）- 原理：考馬斯亮藍G-250染料在酸性溶液中與蛋白質結合后變為藍色，在595nm處有最大的光吸收。染料與蛋白質的結合具有高度的專一性，且結合后顏色變化與蛋白質含量成正比。
- 特點：該方法靈敏度高、操作簡便、快速，適用于0.01~1.0mg/mL濃度的蛋白質溶液測定。且由于染料與蛋白質的結合具有高度的專一性，因此受其他物質干擾較小。
六、其他方法除了以上介紹的方法外，還有BCA法（Bicinchoninic Acid法）、Lowry法、ELISA法（酶聯免疫吸附法）和HPLC法（高效液相色譜法）等多種方法可用于蛋白質含量的測定。這些方法各有特點，適用于不同的測定范圍和條件。 - BCA法：操作更簡單、試劑更穩定、靈敏度更高（微量檢測可達到0.5μg/mL），但需要提前制作標準曲線。
- Lowry法：通過形成蛋白質-銅復合物并還原酚磷鉬酸產生藍色化合物來測定蛋白質含量，過去應用廣泛，但近年來逐漸被考馬斯亮藍法取代。
- ELISA法：基于免疫學反應原理，可用于測定體液中的各種蛋白質，包括含量極少的蛋白質如甲胎蛋白等。
- HPLC法：在藥品定性、定量分析中應用廣泛，也可用于蛋白質含量的測定，具有操作簡便、準確性高的優點。
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發表于 2024-10-24 08:37:28
